Farvning bakterier




farvning bakterier

Vi har det meste af den tid, vi bruger de grundlæggende pletter at undersøge bakterier. grundlæggende pletter på grund af deres positive ladning binder elektrostatisk på negativ ladede molekyler som mange polysaccharider, proteiner og nukleinsyrer. Acid pletter binder til molekyler, der er langt mindre udbredt positivt ladet, hvilket betyder syre pletter bruges kun til særlige formål. Nogle almindeligt stødt grundlæggende pletter er krystalviolet, safranin (et rødt farvestof) og methylenblåt. grundlæggende Pletter kan anvendes alene (en simpel plet) eller i kombination (differential plet) andet eksperiment involverede.



Lidt forskellige teknikker skal anvendes til fremstilling af bakterier til farvning, afhængig af om bakterierne vokser på agar eller i bouillon. Koncentrationen af ​​bakterier i en koloni på en agarplade er ekstremt høj, så det største problem er at have så mange bakterier, der danner en tæt masse, hvor de enkelte onde plet celler og hvis morfologi er vanskelig skelne. I bouillon, er bakterierne relativt spredt, så vi skal sikre vi får et tilstrækkeligt antal på objektglasset, så de ikke er for svære at finde.

Den enkle farve

Trin 1. De bakteriekolonier . Rengør et glas glide og sætte en lille mark lidt off center med en fedt blyant. hjælp løkken, overføre en lille dråbe vand i midten af ​​objektglasset, sikre at være tæt på, men ikke overlapper tegn på fedt blyant. Ikke overføre alt masser af vand, fordi disse dråber bliver nødt til at tørre luft. Steriliser cyklus og røre ved en enkelt koloni og overføre bakterier til vanddråben på glide og bland godt. IKKE indsamle en hel koloni; har du alt for bakterier. Hvis der under blanding ses en mat blanding af bakterier på objektglasset du har for mange bakterier til effektiv farvning.

Trin 1. bouillon bakterier . ren et dias og placere et lille skilt lidt væk fra at bruge et fedt blyant. Omrør bouillon indeholdende bakterierne godt, fordbakterierne kan sedimentere til bunden af ​​beholderen. brug steril løkke og overførsel en eller to dråber af bakterier til midten af ​​en rent objektglas, nær men ikke overlappende fortegnet for fedt blyant.

trin 2 . tørring . Lad den bakterielle opslæmning (Kaldet smear) lufttørre. Du kan IKKE opvarme prøven eller blæse på det for fremskynde tørretid fordi der kunne tvinge bakterierne fører til luft kontaminering og mulig infektion.

fase 3 . varme-fixing . Hold slide på den ene side at passere langsomt gennem en bunsenbrænder flamme. så du skal ikke bevæge sig langsomt at kanten af ​​dias i hånden varmer op til ubehagelige niveauer. Denne fase af varmen fastsættelse denaturerer bakterieproteiner forårsager cellerne til at holde slæden samtidig dræbe bakterier gør dem anvendelige i det følgende trin.

fase 4 . farvning . Sætte pletten i en farvning rack og dække pletten med pletten af ​​valg. Tillad pletten at arbejde i 30 sekunder (nogle pletter kan have forskellige farvende gange, men dette Nu det fungerer godt for simple pletter). Fjerne pletten ved skylning med vand fra flasken og klem forsigtigt skamplet (ikke gnide) pletten tørre bruge sugende kort. Objektglasset er nu parat til at se på under et mikroskop. da bakterier blev sat varme, vil du ikke behøver at bruge en glasplade.

Den Gram-farvning

Den Gram-farvning er klassificeret som en differentieret plet, fordi det giver dig mulighed for at skelne mellem forskellige typer af bakterier. Bakterierne kan hurtigt opdeles i to forskellige morfologiske og funktionelle grupper på grundlag af Gram-farvning. Med denne teknik, Gram positive bakterier farves lilla og gramnegative rød plet. den bakterier er først farves med krystalviolet efterfulgt af en kort treament med Gram jod. Jod fungerer som bejdsemiddel at hjælpe den lilla krystal foreningen mere fast. Bakterierne er derefter skyllet med ethanol. Gram-positive bakterier, som har mere lag af peptidoglycan, bevarer krystalviolet mens den er straks skyllet gramnegative bakterier, fordi deres peptidoglycan Det er et enkelt tykt lag. Bakterierne farves en anden gang (Stained Counter) med safranin farvestof, som ikke vil blive vist på Gram positive lilla allerede, men vil plette bleget Gramnegative bakterier rød.

trin 1 . forberedelse . smøre og varmefiksering af bakterierne som beskrevet ovenfor (trin 1 til 3) af den simple plet.

trin 2 . primære plet . Udstrygningspræparatet overhældes med lilla krystaller og inkuberes 30 sekunder. Skyl pletten med destilleret vand (dH2O) sprøjteflasken.

fase 3 . bejdsemiddel . dække smøre med gram jod. Efter 20 sekunder, skylles slide med dH2O.

fase 4 . misfarvning Skyl pletten med 95% ethanol. Dette trin skal gøres nøje . Hold dias med en vinkel på 45 ° på rack farvning og vask med en ethanol dråbe ad gangen. Kig ethanol som det løber ud slæden i jagten på blå farve. Stop droppe ethanol, så snart det ikke længere er farven er trykning og skylning den umiddelbart objektglasset med vand. Et par dråber af ethanol og alt for mange Gram positive bakterier mister også deres lilla krystal.

fase 5 . kontrast . Dæk bakterierne med safrinin i 30 sekunder. Skyl med dH2O og tør objektglasset og tørre med køkkenrulle.



Efterlad en kommentar