Pletter og farvningsreaktion




bakterier er halvgennemsigtige og er fremstillet af et klart materiale protoplasmisk brydning, der afviger en smule fra det medium, hvori de vokser. Det svært at observere bakterier i var uplettede, undtagen når du bruger særlige metoder til belysning, for at se dem i var upåklageligt. Pletterne er egnede af følgende grunde.
Det gør mikroskopiske objekter halvgennemsigtig synlig

  • At studere form og størrelse
  • Til påvisning af tilstedeværelsen af ​​forskellige interne og eksterne strukturer
  • At producere specifik kemisk og fysisk reaktion

Udtrykket pletten og farvestof er ikke de samme. Et farvestof, der anvendes til almindelige formål, kaldes et farvestof. En, der er anvendt til biologiske formål omtales som en plet. Ifølge deres kemiske adfærd, er farvestofferne klassificeret som sure, basiske og neutrale. En syre farvestof (eller anion) har en negativ ladning. f.eks., Eosin, Rose Bengal og magenta sur. De negativt ladede grupper er carboxyl (COOH) og phenolisk hydroxyl (OH). Da de negativt debiteres, de binder til cellulære strukturer positivt ladede. pH spiller en vigtig rolle i effektiviteten af ​​farvningen, fordi karakteren og graden af ​​ladningen på cellulære bestanddele ændrer sig med pH. Den anioniske farvestoffer farve bedre under sure betingelser, i hvilke proteiner og mange andre molekyler bærer en positiv ladning.



A basisk farvestof (eller kationisk) bærer en positiv ladning. f.eks., methylenblåt, grundlæggende fuchsin, krystalviolet, malachitgrønt, safranin. basiske farvestoffer binder til molekyler, såsom nukleinsyre og mange negativt ladede proteiner. Da de bakterielle celleoverflader er negativt ladede, er basiske farvestoffer oftest anvendes i Bacteriology. Basiske farvestoffer er normalt til rådighed som chloridsalte. En neutral farvestof er et komplekst salt af en syre farvestof-baserede farvestof. De farvestoffer, der anvendes i bakteriologi har to karakteristika til fælles. Har chromoforgrupper, grupper med dobbeltbindinger, som giver farvestoffet farve De kan binde med ion celler, kovalent binding eller hydrofob.
Forholdet mellem den type farvestof og dets ladning, når det dissocieres til summarized.Organic ioner (basisk farvestof)

positiv farvning procedure, et sted, der har en positiv ladning chromophor (farvede del af pletten molekyle) er tiltrukket af den negativt ladede ydre overflade af mikrobiel celle. En plet såsom methylenblåt har en blå positivt ladet del af molekylet, som farver mikroorganisme. I negativ farvning procedurer, er en kromofor negativ ladning afvist af negativt ladede mikroorganismer, hvilket resulterer i negativ farvning eller indirekte mikrobiel celle. Nigrosin og porcelæn anvendes ofte til negativ farvning af mikrobielle celler, og denne type farvning er særligt nyttigt til visualisering af visse strukturer, såsom kapsler, der omgiver nogle bakterieceller.
Pletterne fremstilles generelt stort set som vandige opløsninger. Men i nogle tilfælde stamopløsningerne fremstilles i alkohol, og fortyndes med vand, hvis nødvendigt. Da alkohol fjerner pletter, bør de ikke anvendes rene alkoholiske opløsninger. Farvningen løsninger er forberedt til at indeholde lave koncentrationer af spots sjældent overstiger 1%. en aktivitet meget fortyndet farveopløsning i en længere periode vil give langt bedre resultater derefter en mere koncentreret opløsning handler for et kortere interval. Denne procedure skal følges for at afsløre interne struktur i bakterier.

Interaktionen af ​​en celle med anti-plet midler re- negativ og positiv: Det ydre lag af en celle er negativt ladet og en positiv plet tiltrækkes til cellen, mens en negativ farvning afvises.

Farvelægning noter tolkning reaktioner
Når pH af omgivelserne af de mikrobielle celler i en neutral eller alkalisk måde, alle mikrobielle celler har en negativ ladning på deres overflade, hvilken overfladeladning. Mange bakteriekulturer simpel farvende producerer syrer, dermed tilføre hydrogenioner måde at et dyrkningsmedium og faldende pH. Disse hydrogenioner (H +) interagerer med overfladen af ​​de negative ladninger på overfladen. Når dette sker, den cellulære overflade stærkere tiltrækker positivt ladede ioner farvestof (basiske farvestoffer). Så mikrober fra dårlige syre pletten miljøer med basiske farvestoffer. Af denne grund er de basiske farvestoffer udgøres af alkaliske opløsninger. For eksempel er kaliumhydroxid (KOH) tilsættes til methylenblåt løsninger til dannelse af stedet kaldes methylenblåt Loeffler.
Nogle bakterier udskiller alkaliske materialer under væksten, og dette mindsker antallet af tilgængelige hydrogenioner i dyrkningsmediet. Under sådanne betingelser, celleoverfladen har en større negativ ladning, som er mere attraktivt for basiske og dermed farvestoffer, tillader større binding og indtrængning af mikroben indre farvning. mikroorganismer farvestoffer plet af bedste base i neutrale eller alkaliske forhold.

Hvis basen af ​​farvestoffet molekyle har en negativ ladning, er det afvist af negativt ladet overflade af cellen. Således negativt ladede farvestoffer ikke binder til celleoverfladen, er heller ikke i stand til at trænge ind i cellen. Disse kaldes syrefarvestoffer. Metoden til anvendelse af syrefarvestoffer er forskellige fra de basiske farvestoffer. En sur farvestof blandes med en dråbe af kultur smurt på et objektglas og lodes lufttørre. De negativt ladede celler, der ikke farves af farvestoffet negativt ladet, og fremstår som klart et område omgivet af et område med ny farve. farvestoffer negativ ladning anvendes på denne måde, kaldes negative pletter. I neutrale eller alkaliske forhold, de negative pletter (sure farvestoffer) arbejde bedre, fordi disse forhold skal overfladen afgift for at være mere negativ. negative pletter er af begrænset nytte for dem ved hjælp lysmikroskoper, men kan anvendes til at undgå nogle af ulemperne ved farvning med basiske farvestoffer.

simpel farvning

En simpel farvestofopløsning, indeholder kun en plet, som er opløst i et opløsningsmiddel. Det gælder for mikroorganismen i én applikation. Mikroorganismer giver den karakteristiske farve af farvestoffet opløsning. Formålet med enkle farvning er at afsløre størrelsen og formen af ​​mikroorganismen. De enkle pletter, der er almindeligt anvendt af mikrobiologer til rutinemæssige formål er fortyndede opløsning af Carbol, krystalviolet og methylenblåt. methylenblåt Oftest anvendes end nogen anden plet i bakteriologi. Og 'på grund af sin stærke natur og bejdse kerner og nukleinsyre granulat meget intenst. Methylenblåt anvendes til hurtig detektering af bakteriel population af mælken. Det er også anvendes til diagnosticering af difteri. Denne plet er integreret med eosin lactose agar for at skelne den typiske E. coli i forurenet vand.

Den differentielle farvning

I denne procedure, er mere end et farvestof anvendes. differential farvningsprocedure hjælper at opdele bakterierne i adskilte grupper baseret på farvningskarakteristika. De to vigtigste differentiale pletter anvendes af bacteriologists er Gram-farvning og syrefaste pletten.

Den Gram-farvning

Den enkle farvning procedure gør displayet klart bakterierne, men skelner ikke mellem lignende morfologi organismer. I 1884 har en dansk læge ved navn, Christian Gram opdaget en ny teknik til at differentiere bakterier af lignende morfologi. Han har brugt to farvestoffer i rækkefølge, hver i en anden farve. Organismerne, der bevarer farven af ​​det første farvestof kaldes Gram positive og dem, der ikke kan opretholde det første farvestof efter udvaskning med en Affarvningsopløsningen, men så vil det tage på farven af ​​det andet farvestof kaldes Gram-negative. Ved denne fremgangsmåde er det faste bakteriel udstrygning underkastet følgende regents farve rækkefølge af sekvensen vist nedenfor:
lilla krystal -> jodopløsning -> alkohol (blegemiddel) --- > safranin.

princip
De grampositive bakterier bevarer krystalviolet og synes dyb lilla. De Gram-negative bakterier mister den lilla krystal på misfarvning og tæller farves med Safranin og ser røde. Opløsning af iod anvendes som bejdsemiddel fastsættelse den primære farve eller på et substrat til at kombinere med farvestoffet til dannelse af en uopløselig forbindelse-bidning for første pletten.
er ikke klart forstået den nøjagtige virkningsmekanisme af denne farvning teknik. de mere plausible forklaringer på reaktionerne, er dog forbundet med strukturen og sammensætningen af ​​cellevæggen.
Cellevæggene hos Gram-negative bakterier er tyndere end den for grampositive bakterier og indeholder en procentdel af fedtindholdet. Under farvning af Gram-negative bakterier, behandling af alkoholafhængighed ekstraherer lipid. Det svarer til en forøgelse af porøsitet og permeabilitet af cellevæggen. Den krystalviolet-iod-kompleks (-I CV), kan det ekstraheres og gramnegative bakterier er bleget. Cellerne derefter tage på farven på safranin tæller pletten.
Cellevæggene hos Gram-positive bakterier med et lipid indhold på mindre dehydrering under alkoholbehandling. Porestørrelsen er reduceret, permeabiliteten reduceres, og CV-I-komplekset ikke kan ekstraheres. Derfor forbliver den grampositive celler lilla violet.

endosporer farvning

endospore uddannelse er et karakteristisk træk ved Bacillaceae familie, som omfatter medlemmer af slægten aerobe og anaerobe Bacillus slægten, Clostridium. Endosporer modstå ugunstige miljøforhold, såsom tørke, varme og dårlig indtag af næringsstoffer. Den endospore er en meget udtrækkeligt legeme dannet inden den vegetative bakteriecelle på et vist stadium af vækst. Størrelsen, formen og positionen af ​​sporerne er relativt konstante egenskaber af en given art, og de er derfor af en vis værdi for at skelne den type bacillen fra en anden. Placeringen af ​​sporen i cellen kan være central, sub terminal eller terminal. Kan være den samme diameter af cellen, mindre eller større, hvilket medfører en hævelse af cellen.
Endosporer kraftigt modstå anvendelse af enkle farver, men en farvede tid er stille resistente over for misfarvning. Denne karakter antyder en måde at gøre strukturen synlig. Hvis du bruger simple pletter, Bacillus krop er dybt farvet, mens sporerne ufarvede og fremstår som en lys område i kroppen. Med farvningsprocedurer kraftig farvestoffet kan indføres i sporen stof. Når således farves, sporen har tendens til at fastholde farvestoffet efter behandling med affarvende midler.

at gøre klar sondring mellem de sporer og vegetative del af cellen, er en tæller kontrast plet normalt anvendes i en almindelig måde, og det resulterende billede viser den oprindelige plet taget fra sporer og den anden plet vises i cytoplasmaet. Så det gør det til en meget enkel metode til at skelne de endosporer fra den vegetative celle.



Efterlad en kommentar