Zombie lilla ™ overlevelse kit løses - BioLegend




Standard farvning protokol celler:
1. Vask cellerne med PBS-buffer (Tris-buffer og ingen frit protein). 2. Fortynd
farvestof Zombie Violet ™ 1: 100-1000 i PBS. Resuspender 1-10 x 106 celler i 100 ul fortyndet Zombie Violet ™ løsning. For at minimere baggrundsfarvning af levende celler, indehaveren mængden af ​​farvestof og / eller antallet af celler pr 100 mikroliter til optimal ydeevne. Forskellige typer af celler kan have en stor grad af farvning variabilitet baseret på størrelsen af ​​cellerne og graden af ​​celledød.
Bemærk: ikke bruge Tris buffer som fortynder og være sikker på, at PBS ikke indeholder nogen anden protein, såsom BSA eller FBS.
Bemærk: Mængden af ​​farvestof anvendes, kan også påvirke evnen til at detektere apoptotiske celler, og levende og døde.
4. Inkuber cellerne ved stuetemperatur i mørke i 15-30 minutter.
5. Vask en gang med 2 ml cellefarvning BioLegend Buffer (katalog nr. 420.201) eller tilsvarende buffer indeholdende serum eller BSA.
6. Fortsæt farvning procedure for udførelse af antistofferne som ønsket.
7. Cellerne kan fikseres med paraformaldehyd eller methanol før permeabilisering eller kan analyseres uden fiksering.


No-vask sekventiel farvning Protokol:

1. Vask cellerne med PBS-buffer (Tris-buffer og ingen frit protein).
2. Bestem det totale volumen af ​​ml af antistof cocktails tidligere titreret og optimeret til assayet, der tilføjes til hvert hætteglas / brønd af celler ifølge et slutvolumen på 100 ul. Fratræk denne mængde fra den samlede mængde af antistoffarvning 100 mikroliter bestemt dosering. I residual volumen, fortyndes Zombie Violet ™ farvestof i 1: 100-1000 i PBS, bestemt ved optimering før i dette volumen. For eksempel, hvis du tilføjer 20 l cocktail af antistoffer til et samlet volumen på 100 ml farvning, bruge 80 ml zombie Violet ™ løsning. Resuspender 1-10 x 106 celler i det passende volumen af ​​Zombie Violet ™ løsning. Forskellige typer af celler kan have en stor grad af farvning variabilitet baseret på størrelsen af ​​cellerne og graden af ​​celledød.
Bemærk: ikke bruge Tris buffer som fortynder og være sikker på, at PBS ikke indeholder nogen anden protein, såsom BSA eller FBS.
Bemærk:
Mængden af ​​farvestof anvendes, kan også påvirke evnen til at detektere apoptotiske celler, og levende og døde.
3. Inkubér i 10-15 minutter ved stuetemperatur, beskyttet mod lys. Uden vask af cellerne, tilsæt antistofcocktail overfladen af ​​celler og inkuberet i yderligere 15-20 minutter.
4. Tilsæt 1-2 ml celle puffer (farvelægning Cat. No. 420 201) eller tilsvarende buffer indeholdende BSA eller serum. Pellet centrifuge.
5. Fortsæt med normal fiksering og permeabilisering procedure. Hvis planlægning at springe indstillingen og analysere levende celler, fuldføre en fase med ekstra vask for at minimere enhver unødvendig baggrund af levende celler.

noter: Hvis celletype i brug ikke kan tåle et miljø fri for proteiner, og derefter titreres den Zombie Violet ™ farvestof i nærværelse af den samme mængde BSA / serum som vil være til stede i antistof farvning procedure. En større mængde af zombie Violet ™ kan være nødvendig, da BSA / serum reagerer med og binder vis andel af zombie Violet ™.
farvestof
Zombie Violet ™ er begejstret ved violet laser (405 nm) og har en maksimal emission på 423 nm fluorescens. Hvis du bruger en multi-farve panel, kan det være nødvendigt filteret design optimering afhængigt af andre fluoroforer brugt. farvestof Zombie Violet ™ har emissioner ligner Brilliant Violet 421 ™ og Pacific Blue ™.


Efterlad en kommentar